骆驼刺正丁醇萃取部位中单体化合物的分离纯化及其对人宫颈癌HeLa细胞的影响研究-中国药房

骆驼刺正丁醇萃取部位中单体化合物的分离纯化及其对人宫颈癌HeLa细胞的影响研究

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篇名：	骆驼刺正丁醇萃取部位中单体化合物的分离纯化及其对人宫颈癌HeLa细胞的影响研究
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摘要：	目的：分离纯化骆驼刺正丁醇萃取部位中的单体化合物，并探讨其对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移的影响。方法：采用硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶色谱柱、制备型高效液相色谱等方法对骆驼刺正丁醇萃取部位进行分离纯化，根据理化性质和波谱（质谱、氢谱、碳谱等）数据分析、鉴定化合物结构。以人宫颈癌HeLa细胞为对象，以5-氟尿嘧啶（5-FU）为阳性对照，采用四甲基偶氮唑盐法检测经各化合物不同剂量（均为6.25、12.5、25、50、100、200 μg/mL）预处理后的细胞抑制率，并计算半数抑制浓度（IC50），以筛选活性单体；采用划痕实验考察上述活性单体（均为50 μg/mL）对HeLa细胞迁移能力的影响；采用金氏公式评价5-FU与上述活性单体分别联用[（3.125+6.25）、（6.25+12.5）、（12.5+25）、（25+50）μg/mL]的效果。结果：从骆驼刺正丁醇萃取物部位中共分离得到6个化合物，分别鉴定为紫铆素（Ⅰ）、3′，4′，7-三羟基异黄酮（Ⅱ）、对甲氧基苯乙酸（Ⅲ）、4-羟基苯乙酮（Ⅳ）、橙黄胡椒酰胺（Ⅴ）、原儿茶醛（Ⅵ）。与空白对照组比较，5-FU和各化合物（5-FU：6.25～200 μg/mL各剂量，化合物Ⅰ：12.5～200 μg/mL各剂量，化合物Ⅱ：25、50、200 μg/mL，化合物Ⅲ：6.25、100、200 μg/mL，化合物Ⅳ：50、100、200 μg/mL，化合物Ⅴ：12.5、25、200 μg/mL，化合物Ⅵ：6.25～200 μg/mL各剂量）均可显著升高细胞抑制率，且化合物Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ的IC50值均显著降低（P＜0.05或P＜0.01），其中化合物Ⅰ、Ⅵ的IC50值相对较低。5-FU与化合物Ⅰ、Ⅵ组细胞的迁移距离均较空白对照组显著缩小（P＜0.05或P＜0.01）；5-FU分别与化合物Ⅰ、Ⅵ联用后，对HeLa细胞的增殖具有相加或增强的协同抑制作用（增效指数均大于0.9）。结论：化合物Ⅰ～Ⅵ均为首次从骆驼刺属植物中分离得到，紫铆素和原儿茶醛是其正丁醇萃取部位的活性单体。这2种活性单体均可抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖和迁移，具有较强的体外细胞抑制作用，且与5-FU联用后的抑制作用强于两者分别单用。
ABSTRACT：	OBJECTIVE： To separate and purify Alhagi sparsifolia n-butanol extract monomeric compounds， and to investigate its effects on the proliferation and metastasis of human cervical cancer HeLa cells. METHODS： The n-butanol extract was separated and purified by silica gel column， Sephadex LH-20 gel column and prep-HPLC. The structures of compounds were analyzed and identified according to physicochemical properties and spectrum （mass spectrum， hydrogen spectrum， carbon spectrum） data. Using human cervical cancer HeLa cells as objects， 5-FU as positive control， MTT assay was used to detect the inhibitory rate of HeLa cells pretreated with different doses of compounds （6.25， 12.5， 25， 50， 100， 200 μg/mL）； IC50 was calculated to screen active monomers. Scratch test was used to investigate the effects of above active monomers （all 50 μg/mL） on the migration ability of HeLa cells. Kim’s formula was used to evaluate the effects of 5-FU separately combined with above active monomers [（3.125+6.25），（6.25+12.5），（12.5+25），（25+50）μg/mL]. RESULTS： Six compounds were isolated from the n-butanol extract part of A. sparsifolia and identified as butin （Ⅰ）， 3′，4′，7-trihydroxyisoflavone （Ⅱ）， p-methoxyphenylacetic acid （Ⅲ）， 4-hydroxyacetophenone （Ⅳ）， aurantiamide acetate （Ⅴ）， protocatechualdehydea （Ⅵ）. Compared with blank control group， 5-FU and each compound （5-FU：6.25-200 μg/mL， compound Ⅰ： 12.5-200 μg/mL； compound Ⅱ： 25， 50， 200 μg/mL； compound Ⅲ： 6.25， 100， 200 μg/mL； compound Ⅳ： 50， 100， 200 μg/mL； compound Ⅴ： 12.5， 25， 200 μg/mL； compound Ⅵ： 6.25-200 μg/mL） could significantly increase the cell inhibition rate. IC50 of compound Ⅰ， Ⅴ， Ⅵ were decreased significantly （P＜0.05 or P＜0.01）， and those of compound Ⅰ and Ⅵ were lower relatively. The migration distance of cells in 5-FU and compound Ⅰ and Ⅵgroups were decreased significantly， compared with blank control group （P＜0.05 or P＜0.01）. 5-FU separately combined with compound Ⅰ and Ⅵ showed additive and enhanced inhibitory effects on the proliferation of HeLa cells （synergistic index＞0.9）. CONCLUSIONS： Compounds Ⅰ-Ⅵ are isolated from Alhagi for the first time. Butin and protocatechualdehydea are active monomers of its n-butanol extract part. Above two monomers can inhibit the proliferation and migration of human cervical cancer Hela cells， with strong inhibitory effect in vitro， and stronger inhibitory effect combined with 5-FU than any compound alone.
期刊：	2019年第30卷第4期
作者：	刘雪松，马晓玲，石磊岭，阿勒腾图娅，张大鹏，李宁，魏鸿雁
AUTHORS：	LIU Xuesong，MA Xiaoling，SHI Leiling，Aletengtuya，ZHANG Dapeng，LI Ning，WEI Hongyan
关键字：	骆驼刺；正丁醇萃取部位；单体化合物；抗肿瘤活性；增殖；迁移；联合用药；人宫颈癌Hela细胞
KEYWORDS：	Alhagi sparsifolia； n-butanol extract part； Monomeric compounds； Antitumor activity； Proliferation； Migration； Drug combination； Human cervical cancer HeLa cells
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