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染料木素对人鼻咽癌CNE1细胞生长的抑制作用及靶点预测
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| 篇名： | 染料木素对人鼻咽癌CNE1细胞生长的抑制作用及靶点预测 |
| TITLE： | Inhibitory Effect and Target Prediction of Genistein on the Growth of Human Nasopharyngeal Carcinoma CNE 1 Cells |
| 摘要： | 目的：研究染料木素对人鼻咽癌CNE1细胞生长的抑制作用并预测其可能的作用靶点。方法：采用CCK-8法检测0（空白对照）、12.5、25、50、100、150µmol/L染料木素分别作用24、48、72h对CNE1细胞增殖的影响；分别采用流式细胞术检测0（空白对照）、15、30、60µmol/L染料木素作用24h对CNE1细胞周期、凋亡的影响；采用划痕实验检测0（空白对照）、10、20、30µmol/L染料木素作用24h对CNE1细胞迁移能力的影响。采用高通量测序法挖掘0（空白对照）、30µmol/L染料木素作用24h后CNE1细胞中的差异基因，并通过实时荧光定量-聚合酶链式反应法（RT-qPCR）对上述细胞实验相关差异基因mRNA的表达情况进行验证。结果：与空白对照比较，12.5、25、50、100、150µmol/L染料木素对细胞的增殖均有显著的抑制作用（P＜0.01），且呈浓度-时间-效应趋势；15、30µmol/L染料木素可使细胞周期阻滞于G0/G1期（P＜0.05或P＜0.01），30、60µmol/L染料木素可使细胞周期阻滞于G2/M期并显著促进其凋亡（P＜0.05或P＜0.01）；10、20、30µmol/L染料木素可显著抑制细胞的迁移能力（P＜0.01）。高通量测序共挖掘出2271个差异基因（padj＜0.05），其中1154个基因上调、1117个基因下调；结合细胞实验结果共筛选出p53、p21、STC2、FGF2、CDK6、CYCLIND、PI3K、AKT等8个潜在靶点差异基因。经RT-qPCR法验证，其中p53、p21、STC2、FGF2、CDK6、CYCLIND、AKT等7个潜在靶点差异基因mRNA的表达均显著下调（P＜0.05），与转录组测序结果基本一致。结论：染料木素能有效抑制人鼻咽癌CNE1细胞的生长；其抗鼻咽癌机制可能与抑制突变型p53基因的表达，恢复野生型P53蛋白功能以及抑制磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路的活性有关。 |
| ABSTRACT： | OBJECTIVE：To study the inhibi tory effects of genistein on the growth of human nasopharyngeal carcinoma. CNE 1 cells and predict its potential target. METHODS ：CCK-8 method was used to test the effects of 0（blank control ），12.5，25，50， 100，150 µmol/L genistein on the proliferation of CNE 1 cells after treated for 24，48，72 h. Flow cytometry was carried out to detect the effects of 0（blank control ），15，30，60 µmol/L genistein on the cell cycle and ap optosis of CNE 1 cells after treated for 24 h. Scratch test was used to investigate the effects of 0（blank control ）， 10， 20， 30 µmol/L genistein on themigration ability of CNE 1 cells after treated for 24 h. High （No.18210156） throughput sequencing was conducted to discover the differential genes in CNE 1 cells after treated with 0（blankcontrol），30 µmol/L genistein for 24 h. RT-qPCR assay was adopted to verify the mRNA expression of related differential genes in above trials. RESULTS ： Compared with blank control，12.5，25，50，100，150 µmol/L genistein sho wed significant inhibitory effect on the proliferation of CNE 1 cells（P＜ 0.01），in a concentration- time-effect manner ；15，30 µmol/L genistein could arrest CNE 1 cell cycle at G 0/G1 stage（P＜0.05 or P＜ 0.01）；30，60 µmol/L could arrest CNE 1 cell cycle at G 2/M stage and promoted cell apoptosis （P＜0.05 or P＜0.01）. 10，20，30 µmol/L genistein could significantly inhibit the migration ability of CNE 1 cells（padj＜0.01）. High throughput sequencing revealed a total of 2 271 differentialgenes（P＜0.05），1 154 of which were up-regulated while 1 117 of which were down-regulated ；8 potential target genes ，including p53，p21，STC2，FGF2，CDK6，CYCLIN D ，PI3K，AKT，were screened by cell experiment. After validated by RT-qPCR assay ，mRNA expression of p53，p21，STC2，FGF2，CDK6，CYCLIN D and AKT were significantly down-regulated（P＜0.05），which consistent with the sequencing results. CONCLUSIONS ：Genistein can effectively inhibit the growth of human nasopharyngeal carcinoma CNE 1 cells，the mechanism of which may associated with inhibiting the expression of mutant gene p53，restoring the function of wild-type P 53 protein and inhibiting the activity of PI 3K/Akt pathway. |
| 期刊： | 2021年第32卷第10期 |
| 作者： | 何文栋，苏雯清，韦坤华，奎玲，王硕，龚小妹，杨晓男，缪剑华 |
| AUTHORS： | HE Wendong， SU Wenqing，WEI Kunhua，KUI Ling，WANG Shuo，GONG Xiaomei，YANG Xiaonan，MIAO Jianhua |
| 关键字： | 染料木素；人鼻咽癌CNE1细胞；高通量测序；突变型p53基因；磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路 |
| KEYWORDS： | Genistein；Human nasopharyngeal carcinoma CNE 1 cells；High throughput sequencing ；Mutant gene p53；PI3K/ |
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