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壳聚糖氧化石墨烯负载冬凌草甲素对A549细胞增殖及凋亡的影响
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| 篇名： | 壳聚糖氧化石墨烯负载冬凌草甲素对A549细胞增殖及凋亡的影响 |
| TITLE： | Effects of Oridonin-loaded Chitosan Graphene Oxide on the Proliferation and Apoptosis of A 549 Cells |
| 摘要： | 目的：研究壳聚糖氧化石墨烯载体（CS-GO）负载冬凌草甲素（CS-GO-oridonin）对人肺癌细胞A549增殖及凋亡的影响。方法：以A549细胞为对象，采用CCK-8法检测经不同质量浓度的CS-GO（3、6、12、24、48μg/mL）和负载了等质量冬凌草甲素的CS-GO-oridonin（3、6、12、24、48μg/mL，以冬凌草甲素质量计，下同）作用后的细胞存活率，并计算CS-GO-oridonin的半数抑制浓度（IC50）；采用显微镜观察CS-GO和CS-GO-oridonin（均为32μg/mL）作用2、4、10、24h后的细胞形态，并采用荧光标记法观察细胞对CS-GO、冬凌草甲素、CS-GO-oridonin（均为32μg/mL）的摄取情况；采用流式细胞术观察不同质量浓度CS-GO（16、32、64μg/mL）和CS-GO-oridonin（16、32、64μg/mL）作用后细胞的凋亡情况及细胞中活性氧（ROS）的含量，采用Westernblot法检测细胞中抗凋亡相关蛋白[髓样细胞白血病1（Mcl-1）、Bax、Bak]蛋白的表达情况。结果：经不同质量浓度CS-GO作用后，细胞的存活率仍不低于90％；经不同质量浓度CS-GO-oridonin作用后，细胞存活率呈下降趋势，且显著低于相同质量浓度的CS-GO组（P＜0.01）；CS-GO-oridonin的IC50为32.61μg/mL。经CS-GO作用后，细胞形态未见明显改变；经CS-GO-oridonin作用后，细胞出现皱缩、成团脱落、悬浮物增多等现象；当细胞摄取冬凌草甲素和CS-GO-oridonin后，其荧光均较摄取CS-GO的细胞有所增强。与空白组比较，CS-GO16、32、64μg/mL组细胞的凋亡率和细胞中ROS含量、凋亡相关蛋白的表达水平均无显著变化（P＞0.05）；而CS-GO-oridonin16、32、64μg/mL组细胞的凋亡率、细胞中ROS含量和Bax、Bak蛋白的表达水平均显著升高，Mcl-1蛋白的表达水平均显著降低，且上述指标水平均显著高于或低于同质量浓度CS-GO组（P＜0.05）。结论：CS-GO不会影响A549细胞的增殖及凋亡；CS-GO-oridonin对细胞有明显的抑制和促凋亡作用，这种作用可能与增加细胞中ROS的产生、调控凋亡相关蛋白的表达有关。 |
| ABSTRACT： | OBJECTIVE：To study the effects of chitosan graphene oxide car rier（CS-GO）loaded with oridonin （CS-GO- oridonin）on the proliferation and apoptosis of human lung cancer A 549 cells. METHODS ：Taking A 549 cells as objects ，the survival rate of cells were detected by CCK- 8 method after treated with different concentrations of CS-GO （3，6，12，24，48 μg/mL）and CS-GO-oridonin loaded with same mass of oridonin （3，6，12，24，48 μg/mL，by the weight of oridonin ，the same below）. IC 50 of CS-GO-oridonin was calculated. The cell morphology were observed by microscope after treated with CS-GO and CS-GO-oridonin（both 32 μg/mL）for 2，4，10，24 h. The uptake of CS-GO ，oridonin，CS-GO-orionin（all 32 μg/mL）by cells was observed with fluorescence labeling method. The apoptosis of cells and the content of ROS were observed by flow cytometry after treated with different concentrations of CS-GO （16，32，64 μg/mL）and CS-GO-oridonin （16，32，64 μg/mL）. The expression of anti-apoptosis related proteins （Mcl-1，Bax and Bak ）were detected by Western blot. RESULTS ：After treated with different concentrations of CS-GO ，the survival rate of cells was still above 90％ ；after treated with different concentrations of CS-GO-oridonin，the survival rate of cells showed a downward trend ，and was significantly lower than that of CS-GO group （P＜ 0.01）；IC50 of CS-GO-oridonin was 32.61 μg/mL. After CS-GO treatment，the cell morphology did not change significantly ；after CS-GO-oridonin treatment ，the cells shrunk and fell off in clusters ，and the suspended matter increased ；the fluorescence of oridonin and CS-GO-orionin taken up by cells was enhanced than CS-GO. Compared with blank group ，there was no significant change in the apoptosis rate ，the content of ROS and the expression of apoptosis-related protein in 16，32，64 μg/mL CS-GO groups（P＞0.05）；apoptosis rate ，the content of ROS ，the protein expression of Bax and Bak in 16，32，64 μg/mL CS- GO-oridonin groups were increased significantly ，while the protein expression of Mcl- 1 were decreased significantly. Above indexes were significantly high er or lower than the same concentration CS-GO group （P＜0.05）. CONCL USIONS：CS-GO dose not affect the proliferation and apoptosis of A 549 cells；CS-GO-oridonin has obvious inhibition and apoptosis promoting effect on cells ，which may be related to increasing ROS production and regulating the expression of apoptosis related proteins. |
| 期刊： | 2021年第32卷第13期 |
| 作者： | 谢谭芳，朱小勇，黄天衍 |
| AUTHORS： | XIE Tanfang ，ZHU Xiaoyong ，HUANG Tianyan |
| 关键字： | 壳聚糖氧化石墨烯载体；冬凌草甲素；A549细胞；增殖；凋亡 |
| KEYWORDS： | Chitosan graphene oxide carrier ；Oridonin；A549 cells；Proliferation；Apoptosis |
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