蛋白激酶B抑制剂CCT128930对人骨肉瘤U2-OS细胞凋亡与自噬的影响-中国药房

蛋白激酶B抑制剂CCT128930对人骨肉瘤U2-OS细胞凋亡与自噬的影响

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篇名：	蛋白激酶B抑制剂CCT128930对人骨肉瘤U2-OS细胞凋亡与自噬的影响
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摘要：	目的：研究蛋白激酶B抑制剂CCT128930对人骨肉瘤U2-OS细胞凋亡与自噬的影响。方法：体外培养U2-OS细胞，经0（空白对照，下同）、10、20 μmol/L CCT128930作用24 h后采用DNA片段末端标记法观察U2-OS细胞的凋亡情况；经0、5、10、20 μmol/L CCT128930作用24 h后采用Western blot法检测细胞中半胱氨酸氨基转移酶3（Caspase-3）、Caspase-8、Caspase-9、Caspase切割底物PARP蛋白表达及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ比例；将质粒绿色荧光蛋白-微管相关蛋白轻链3（GFP-LC3）转染U2-OS细胞，经0、5、10 μmol/L CCT128930作用24 h后采用荧光观察GFP-LC3融合蛋白在细胞内的表达；采用MTT法和Western blot法检测20 μmol/L氯喹、CCT128930及二者联合作用于细胞24 h后的细胞活力及Caspase-3、PARP蛋白的表达。结果：与空白对照比较，CCT128930作用后U2-OS细胞凋亡率升高（P＜0.01），Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、PARP蛋白表达增强，LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ比例升高（P＜0.05或P＜0.01），GFP-LC3融合蛋白表达增强；与氯喹联用后，使U2-OS细胞活力和Caspase-3、PARP蛋白表达均下降。结论：CCT128930可诱导U2-OS细胞发生凋亡和自噬，抑制自噬可能促进CCT128930对U2-OS细胞的毒性作用。
ABSTRACT：	OBJECTIVE： To study the effects of protein kinase B inhibitor CCT128930 on the apoptosis and autophagy of human osteosarcoma U2-OS cells. METHODS： U2-OS cells were cultured in vitro， and the apoptosis of U2-OS cell was observed after treated with 0 （blank control， similarly hereinafter）， 10 and 20 μmol/L CCT128930 for 24 h. After treated with 0， 5， 10 and 20 μmol/L CCT128930 for 24 h， the protein expression of Caspase-3， Caspase-8， Caspase-9 and Caspase cutting substrate PARP， the proportion of autophagy-related protein LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ were detected by Western blot method. Plasmid GFP-LC3 transfected U2-OS cells； after treated with 0， 5 and 10 μmol/L CCT128930 for 24 h， immunofluorescence was used to detect the expression of GFP-LC3 protein. MTT assay and Western blot assay were used to detect the viability， the expression of Caspase-3 and PARP protein of U2-OS cells after treated with 20 μmol/L chloroquine and CCT128930 alone or combination for 24 h. RESULTS： Compared with blank control， the apoptotic rate of U2-OS cells increased after CCT128930 treatment （P＜0.01）， and the expression of Caspase-3， Caspase-8， Caspase-9 and PARP protein increased； the proportion of LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ increased （P＜0.05 or P＜0.01）； the expression of GFP-LC3 protein increased. CCT128930 combined with chloroquine reduced the viability of U2-OS cells， the protein expression of Caspase-3 and PARP. CONCLUSIONS： CCT128930 can induce the apoptosis and autophagy of U2-OS cells. Blocking autophagy can enhance the toxicity of CCT128930 to U2-OS cells.
期刊：	2016年第27卷第13期
作者：	周运生，王凤泽
AUTHORS：	ZHOU Yunsheng，WANG Fengze
关键字：	蛋白激酶B；CCT128930；细胞凋亡；细胞自噬；人骨肉瘤U2-OS细胞
KEYWORDS：	Protein kinase B； CCT128930； Apoptosis； Autophagy； Human osteosarcoma U2-OS cells
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